動物：雄性DBA1/J 小鼠 (6–8 周)

Ⅱ型膠原：

Ⅱ型膠原（typeⅡ collagen, CⅡ）以凍干粉形式購買，將其溶解在乙酸（10mM）中，通過溫和攪拌數(shù)小時至過夜獲得所需濃度（2-4 mg /ml）。當(dāng)膠原蛋白溶解后，將其分為等份，冷凍-70℃。試劑和玻璃器皿應(yīng)預(yù)先4℃冷卻避免使CⅡ變性，注意攪拌板處于開啟狀態(tài)，在寒冷的房間里也不會產(chǎn)生熱量。

乳化液的制備：

1.計(jì)算制備乳化液所需的膠原蛋白和完全弗氏佐劑（Complete Freund adjuvant, CFA）的體積，比例為1:1，每只小鼠需要50μl乳化液。

注意事項(xiàng)：使用組織勻漿器進(jìn)行乳化，乳化過程中，盡可能將所有試劑放在冰上。保持試劑低溫可防止CⅡ變性，這對于在小鼠模型中誘發(fā)高發(fā)病率至關(guān)重要。

2. 將膠原蛋白一滴一滴地添加到CFA中，同時以中速混合乳化液，保持在低溫下操作。

3. 從勻漿器中取出乳化液，確保乳化液完全混合，外觀和粘度與攪打奶油相同。如果乳化程度不令人滿意，則進(jìn)一步用勻漿器混合以提高乳化液質(zhì)量。

4. 將乳化液轉(zhuǎn)移到1毫升注射器中進(jìn)行免疫接種。

建模：

    麻醉小鼠，選擇距尾基部約1.5cm的注射部位，慢慢地將50μl乳化液皮內(nèi)注射（i.d.）至尾部。二次免疫有時在接種后14或21天，以確保高發(fā)病率，所用的CⅡ濃度與初次免疫的相同；但是，CⅡ在不完全弗氏佐劑（Incomplete Freund adjuvant, IFA）中乳化用于此免疫。注射部位同樣位于尾部，靠近初次注射部位。

模型評估：

每周對小鼠進(jìn)行兩到三次關(guān)節(jié)炎發(fā)病率評估。每個爪子應(yīng)在0-4分的范圍內(nèi)進(jìn)行評估和單獨(dú)評分，4分表示最嚴(yán)重的炎癥。

0分：沒有紅斑和腫脹的跡象。

1分：局限于跗骨或踝關(guān)節(jié)的紅斑和輕度腫脹。

2分：從腳踝到跗骨的紅斑和輕度腫脹。

3分：從腳踝到跖骨關(guān)節(jié)的紅斑和中度腫脹。